MET-5A 人膜間皮細胞培養手冊

貨號：WS0397H

規格：1×10?cells/T25培養瓶

細胞特性

1） 來源：間皮

2） 形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細胞處理：

凍存細胞的復蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

一、細胞培養的原理

細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。

細胞培養可分為原代培養和傳代培養；直接從體內獲取的組織細胞進行shou次培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度后，則需要傳代培養，即將培養的細胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器（同樣底面積的容器）中擴大培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數，腫瘤細胞系一般不超過50代。因此需要在每一次傳代后，標記清楚（如P10，代表傳代了10次）。

二、所需試劑和耗材

1、所需試劑

（1）wan全培養基：一般是用DMEM+10% FBS（胎牛血清，有時也添加雙/三抗預防細胞感染。具體培養基類型根據細胞類型選擇。培養基有不同類型，除了DMEM，還有1640等培養基，根據自己的細胞使用響應的培養基。可以在ATCC查看。

（2）0.25 %胰蛋白酶：簡稱是胰酶，消化細胞。一般消化1-2 min，時間太短，細胞消化不wan全，時間太長，會消化過度損傷細胞。

（3）凍存液：一般用 10% DMSO+FBS+培養基組成，FBS 和培養基的比例依細胞類型決定，比較珍貴的細胞一般用 90% FBS + DMSO，一般的細胞可以用50% FBS+40% 培養基來配制。現配現用。

（4）常用試劑：75% 酒精，PBS緩沖液等。

2、耗材

（1）細胞培養容器：培養瓶 25、50、250ml 等，培養皿：10cm、6cm，孔板：6孔板、12孔板、24孔板、96孔板等。具體根據情況進行選擇對應的容量

（2）吸管、移液管、凍存管、各種槍和槍頭、離心管、封口膜等。

三、實驗儀器

離心機、生物安全柜、二氧化碳細胞培養箱、顯微鏡、液氮罐等

MET-5A 人膜間皮細胞

大鼠主動脈平滑肌細胞 A7R5

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) PC-12(低分化)

大鼠β胰島素瘤細胞 RIN-M5F

大鼠脊髓前角運動神經元瘤細胞 VSC4.1

大鼠骨肉瘤細胞 UMR-106

大鼠腦I型星形膠質細胞 CTX-TNA2

大鼠垂體瘤細胞 MMQ

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化) PC-12(未分化)

大鼠嗜堿性細胞白血病細胞 RBL-2H3

大鼠少突膠質前體細胞系 OLN-93

大鼠垂體瘤細胞 GH3

大鼠骨骼肌成肌細胞 L6

正常大鼠腎細胞 NRK-49F

大鼠皮膚成纖維樣細胞 RS1

大鼠肺泡Ⅱ型細胞 RLE-6TN

大鼠胰腺外分泌腺腫瘤細胞 AR42J

大鼠小腸隱窩上皮細胞 IEC-6

大鼠神經膠質瘤細胞 C6

大鼠胚胎心肌細胞 H9c2(2-1)

大鼠背根神經節細胞 DRG

大鼠肝癌細胞 H4-II-E-C3

大鼠正常肝細胞 BRL3A

大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化) PC-12(高分化)

大鼠空腸膠質細胞 EGCCRL-2690

大鼠雪旺細胞 RSC96

大鼠腎小球系膜細胞 HBZY-1

大鼠膠質肉瘤細胞 9L/lacZ

大鼠胰島細胞瘤細胞 INS-1

大鼠肝上皮樣干細胞 WB-F344

正常大鼠腎細胞 NRK-52E

大鼠小膠質細胞 HAPI

小鼠乳腺癌細胞 AT-3

小鼠肺上皮細胞 TC-1

小鼠鱗狀細胞癌細胞 SCC7

小鼠垂體瘤細胞 AtT-20

小鼠淋巴結上皮細胞 SVEC4-10

小鼠胚胎纖維細胞 STO

小鼠睪丸間質細胞 TM3

小鼠急性骨髓性白血病 C1498

小鼠主動脈血管平滑肌細胞 MOVAS

小鼠黑色素瘤細胞 B16

小鼠乳腺癌細胞 E0771

小鼠樹突狀瘤細胞 DC2.4

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 RAW264.7

小鼠成纖維細胞 NCTCclone929

小鼠腦微血管內皮細胞株 bend.3

小鼠胚胎成纖維細胞 C3H/10T1/2

小鼠心肌細胞　 HL-1

小鼠腦神經瘤細胞 Neuro-2a

小鼠胚胎成纖維細胞 MEF

小鼠腎小管上皮細胞 TCMK-1

小鼠單核巨噬細胞 J774A.1

小鼠胚胎肌母 C2C12

小鼠前脂肪胚胎成纖維細胞 3T3-L1

小鼠肺泡上皮細胞 MLE-12

小鼠乳腺上皮細胞 HC11

小鼠視網膜神經節細胞株 RGC-5

小鼠結腸癌細胞株 MC-38

小鼠淋巴瘤細胞(NK靶細胞) YAC-1

小鼠T淋巴瘤細胞（雞OVA基因修飾） E.G7-OVA

小鼠正常肝細胞 NCTC1469

小鼠肺泡巨噬細胞 MH-S

小鼠肺腺癌細胞 LA7120

小鼠腎小球足細胞 mpc-5

小鼠T淋巴細胞 CTLL-2

小鼠主動脈內皮細胞 MAEC

正常小鼠睪丸Sertoli細胞 TM4

小鼠淋巴細胞白血病 L1210

小鼠腹水瘤細胞 S-180

小鼠雜交瘤（抗CD2）細胞 OKT11

小鼠小腦細胞 C8-D1A

小鼠睪丸間質細胞瘤細胞 MLTC-1

小鼠下丘腦神經元細胞 GT1-7

小鼠黑色素瘤細胞 B16-F10

小鼠結腸癌細胞 CT26.WT

小鼠皮下結締組織細胞 L Wnt-3A

小鼠血管內皮瘤細胞 EOMA

小鼠神經干細胞 NE-4C

小鼠胰島β細胞株 Min6

小鼠B細胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌細胞 Hepa1-6

小鼠小膠質細胞 Bv-2

小鼠乳腺癌細胞 4T1

小鼠胚胎瘤細胞 ATDC5

小鼠胰腺癌細胞 PANC02

小鼠膠質瘤細胞 GL261

小鼠肺癌細胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨細胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌細胞 EMT6

小鼠海馬神經元細胞 HT22

小鼠小腸內分泌細胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮細胞 EpH4-Ev