小鼠原代棕色脂肪細胞|原代細胞培養

簡介：脂肪組織在體內有在胞漿內積聚脂滴的成熟脂肪細胞和未在胞漿內積聚脂滴但有這種潛能的前脂肪細胞。前脂肪細胞呈梭形，是一類具有增殖和向脂肪細胞分化能力的特異化了的前提細胞，與肥胖有著非常密切的關系。

貨號：WS-Q1269

規格：1×10? 細胞/T25 培養瓶

一、細胞基本信息

- 細胞來源：正常脂肪組織

- 細胞形態：長梭狀細胞樣，不規則細胞樣，貼壁生長

-傳代比例/細胞消化：1:2傳代

- 倍增時間：每周2-3次

- 細胞含量：＞1×10? 細胞/瓶

- 包裝規格：T25 培養瓶 / 1mL 凍存管

- 產品用途：僅供科研使用，不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

二、培養基與培養條件

1. 培養基

基礎培養基500ml；生長添加劑5ml；胎牛血清50ml；雙抗5ml

推薦血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培養條件

- 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%

3. 凍存與儲存

- 凍存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（現配現用）

- 儲存條件：液氮長期保存

三、運輸形式與接收處理

1. 常溫發貨（T25 瓶活細胞）

收到細胞后，先對 T25 培養瓶瓶身進行表面消毒；將培養瓶放入培養箱靜置 2 - 3 小時；觀察細胞密度與生長狀態，拍攝 2 - 3 張清晰照片反饋給銷售；細胞密度達標即可進行傳代，前期傳代比例建議為 1:2；待細胞再次長滿后，將其中一整瓶細胞凍存為 1 支 1mL 凍存管，另一瓶繼續傳代；建議反復凍存 2 - 3 支種子細胞后，再進行擴增實驗，避免因突發情況導致細胞斷種。

備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用于培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議 T25 培養瓶按 1:2 傳代。

2. 干冰發貨（凍存管細胞）

常規發貨為 2 支凍存管，建議復蘇 1 支、留存 1 支備用；若支復蘇失敗，嚴格按照廠家標準復蘇流程操作第二支；若兩支均復蘇失敗，請立即留存復蘇全過程照片，并時間通知銷售處理。

四、細胞培養步驟

1.凍存細胞復蘇

- 將 1mL 細胞懸液凍存管置于 37℃水浴，快速搖晃至解凍；

- 加入含 4 - 6mL 培養基的離心管中輕柔混勻；

- 1000RPM 離心 3 - 5 分鐘，棄去上清液；

- 用培養基重懸細胞，接種至含 6 - 8mL 培養基的培養瓶/皿；

- 37℃培養過夜，次日在顯微鏡下觀察細胞生長狀態與密度。

2.對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：（細胞密度 80% - 90% 可傳代）

- 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培養瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培養箱中消化 1 - 2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培養基來終止消化。

- 輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3 - 5min，棄去上清液，補加 1 - 2mL 培養液后吹勻。將細胞懸液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按 1:2 - 1:5 的比例進行。

3.對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

- 注：次傳代推薦傳代比例為 1:2，以后傳代比例可根據客戶需要自行決定。

- 方法一：收集細胞，1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1 - 2mL 培養液后吹勻，將細胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

4.細胞凍存：收到細胞后建議在培養前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

五、生物安全注意事項

1. 所有動物細胞均視為具有潛在生物危害性，必須在二級生物安全柜內操作，做好個人防護；所有廢液及接觸過細胞的器皿，需經滅菌處理后方可丟棄。

2. 復蘇凍存細胞時，務必佩戴防護手套、防護服及防護面罩；凍存管浸沒在液氮中可能發生泄漏并灌入液氮，解凍時液氮氣化易導致容器爆裂、瓶蓋崩飛造成人員劃傷等傷害，操作時務必謹慎。

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